Fluorescence cross-correlation spectroscopy (FCCS) was introduced by Eigen and Rigler in 1994 and experimentally realized by Schwille in 1997. It is essentially an extension of the fluorescence correlation spectroscopy (FCS) procedure by utilizing two differentially colored molecules, instead of one. In other words, coincident green and red intensity fluctuations of distinct molecules correlate if green and red labeled particles are moving together through a predefined confocal volume. As a result, FCCS provides a highly sensitive measurement of molecular interactions independent of diffusion rate. This is an important advancement, given that diffusion rate depends only weakly on the size of the molecular complex.
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| - Spectroscopie à corrélation croisée de fluorescence (fr)
- Fluorescence cross-correlation spectroscopy (en)
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| - Fluorescence cross-correlation spectroscopy (FCCS) was introduced by Eigen and Rigler in 1994 and experimentally realized by Schwille in 1997. It is essentially an extension of the fluorescence correlation spectroscopy (FCS) procedure by utilizing two differentially colored molecules, instead of one. In other words, coincident green and red intensity fluctuations of distinct molecules correlate if green and red labeled particles are moving together through a predefined confocal volume. As a result, FCCS provides a highly sensitive measurement of molecular interactions independent of diffusion rate. This is an important advancement, given that diffusion rate depends only weakly on the size of the molecular complex. (en)
- La spectroscopie de corrélation croisée de fluorescence (SCCF) a été introduite en 1994 par Eigen et Rigler et appliquée expérimentalement en 1997 par Petra Schwille. Il s'agit essentiellement d'une extension de la méthode de spectroscopie de corrélation de fluorescence (SCF) consistant à utiliser deux molécules de couleurs distinctes, au lieu d'une seule. En d'autres termes, les fluctuations d'intensité verte et rouge de molécules distinctes sont corrélées si les particules marquées vert et rouge se déplacent ensemble dans un volume confocal prédéfini. En conséquence, la SCCF permet de mesurer avec une haute sensibilité les interactions moléculaires indépendamment du taux de diffusion. Il s'agit d'un progrès important, dû au fait que le taux de diffusion ne dépend que faiblement de la tai (fr)
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| - Fluorescence cross-correlation spectroscopy (FCCS) was introduced by Eigen and Rigler in 1994 and experimentally realized by Schwille in 1997. It is essentially an extension of the fluorescence correlation spectroscopy (FCS) procedure by utilizing two differentially colored molecules, instead of one. In other words, coincident green and red intensity fluctuations of distinct molecules correlate if green and red labeled particles are moving together through a predefined confocal volume. As a result, FCCS provides a highly sensitive measurement of molecular interactions independent of diffusion rate. This is an important advancement, given that diffusion rate depends only weakly on the size of the molecular complex. FCCS utilizes two species which are independently labeled with two differently colored fluorescent probes. These fluorescent probes are excited and detected by two different laser light sources and detectors usually labeled as "green" and "red". Typically a confocal microscope is used to provide overlapping green and red focal volumes for excitation. The normalized cross-correlation function is defined for two fluorescent species and which are independent green, G and red, R channels as follows: where differential fluorescent signals at a specific time, and at a delay time, later is correlated with each other. In the absence of spectral bleed-through, the cross-correlation function is zero for non-interacting particles. In contrast to FCS, the cross-correlation function increases with increasing numbers of interacting particles. FCCS is primarily utilized for measurements of bio-molecular interactions both in living cells and in vitro. It can be utilized to measure simple molecular stoichiometries and binding constants. It is one of the few techniques that can provide information about protein-protein interactions at a specific time and location within a living cell. In contrast to fluorescence resonance energy transfer, it does not have a distance limit for interactions. As a result, it can be utilized to probe large complexes. Nevertheless, it does require that complexes be actively diffusing through the microscope focus on a relatively short time scale (typically seconds). (en)
- La spectroscopie de corrélation croisée de fluorescence (SCCF) a été introduite en 1994 par Eigen et Rigler et appliquée expérimentalement en 1997 par Petra Schwille. Il s'agit essentiellement d'une extension de la méthode de spectroscopie de corrélation de fluorescence (SCF) consistant à utiliser deux molécules de couleurs distinctes, au lieu d'une seule. En d'autres termes, les fluctuations d'intensité verte et rouge de molécules distinctes sont corrélées si les particules marquées vert et rouge se déplacent ensemble dans un volume confocal prédéfini. En conséquence, la SCCF permet de mesurer avec une haute sensibilité les interactions moléculaires indépendamment du taux de diffusion. Il s'agit d'un progrès important, dû au fait que le taux de diffusion ne dépend que faiblement de la taille du complexe moléculaire. La SCCF utilise deux espèces qui sont marquées indépendamment avec deux sondes fluorescentes de couleurs différentes. Ces sondes fluorescentes sont excitées et détectées par deux sources de lumière laser et détecteurs différents, généralement étiquetés « verts » et « rouges ». Généralement, un microscope confocal est utilisé pour fournir des volumes focaux vert et rouge qui se chevauchent pour l'excitation. où les signaux fluorescents différentiels à un temps donné et à un temps décalé de sont corrélés. En l'absence de recouvrement spectral, la fonction de corrélation croisée est nulle pour les particules qui n'interagissent pas. Contrairement au SCF, la fonction de corrélation croisée augmente avec l'augmentation du nombre de particules en interaction. La SCCF est principalement utilisé pour la mesure des interactions biomoléculaires que ce soit dans les cellules vivantes ou in vitro. Elle peut être utilisée pour mesurer des stœchiométries moléculaires simples et des constantes de liaison. Il s'agit de l'une des rares techniques qui peuvent fournir des informations sur les interactions entre protéines à un moment et à un endroit précis dans une cellule vivante. Contrairement au transfert d'énergie entre molécules fluorescentes, elle n'a pas de limite de distance pour les interactions. En conséquence, elle peut être utilisée pour sonder de grands complexes. Néanmoins, cela nécessite que les complexes diffusent activement à travers le foyer du microscope sur une échelle de temps relativement courte (généralement quelques secondes). (fr)
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