| dbo:abstract
|
- Die Ligase-Kettenreaktion (englisch Ligase Chain Reaction, LCR) ist seit 1989 ein Nachweisverfahren für geringe Mengen von Erbmaterial (DNA). (de)
- The ligase chain reaction (LCR) is a method of DNA amplification. The ligase chain reaction (LCR) is an amplification process that differs from PCR in that it involves a thermostable ligase to join two probes or other molecules together which can then be amplified by standard polymerase chain reaction (PCR) cycling (Barany, 1991). Each cycle results in a doubling of the target nucleic acid molecule. A key advantage of LCR is greater specificity as compared to PCR. Thus, LCR requires two completely different enzymes to operate properly: ligase, to join probe molecules together, and a thermostable polymerase (e.g., Taq polymerase) to amplify those molecules involved in successful ligation. The probes involved in the ligation are designed such that the 5′ end of one probe is directly adjacent to the 3′ end of the other probe, thereby providing the requisite 3′-OH and 5′-PO4 group substrates for the ligase. LCR was originally developed to detect point mutations; a single base mismatch at the junction of the two probe molecules is all that is need to prevent ligation. By performing the ligation right at the Tm of the oligonucleotide probe, only perfectly matched primer:template duplexes will be tolerated. LCR can also be used to amplify template molecules that have been successfully ligated for the purpose of assessing ligation efficiency and producing a large amount of product with even greater specificity than PCR. Thus, LCR is not necessarily an alternative, but rather a complement, to PCR. (en)
- La Reacción en cadena de la ligasa o LCR (del inglés, Ligase Chain Reaction) es un método similar a la PCR, pero basándose en la función de una ligasa termoestable (normalmente la ligasa de Thermus aquaticus). Al igual que con la PCR, con la LCR se puede amplificar una secuencia de ADN concreta, así como determinar una mutación de una base nucleotídica. (es)
- La reazione a catena della ligasi (o Ligase chain reaction, LCR) è una variante della reazione a catena della polimerasi (Polymerase chain reaction o PCR).È una metodica che permette l'amplificazione di materiale genetico sfruttando un processo ciclico che viene ripetuto più volte. A differenza della PCR, però, viene sfruttata l'azione di una ligasi termostabile e la presenza di quattro oligonucleotidi in grado di appaiarsi, a due a due, a specifiche sequenze della molecola di DNA. Nella soluzione in cui si trova il materiale genetico si aggiunge la ligasi, gli oligonucleotidi (in quantità elevata), dessossiribonucleotidi trifosfati ed una DNA-polimerasi anch'essa termostabile. Dopo che il DNA è stato denaturato, aumentando la temperatura della soluzione in cui si trova, si procede ad un raffreddamento che permette l'ibridazione degli oligonucleotidi con le sequenze bersaglio ad essi complementari. A questo punto la DNA-polimerasi sfrutta gli oligonucleotidi ibridizzati come inneschi ed inizia a sintetizzare un nuovo filamento di DNA usando quello di partenza come stampo. L'azione della polimerasi fa sì che i due oligonucleotidi vengano collegati tra loro tramite il filamento neosintetizzato. Questi tre filamenti, però, non sono ancora uniti; a questo provvede la ligasi attraverso la formazione di legame covalente tra di loro.In tale modo viene a crearsi un filamento unico che verrà utilizzato come stampo nei cicli successivi. Tutto il processo è riassunto nel seguente schema: Qualora la distanza tra i due oligonucleotidi sia inferiore a tre nucleotidi si può utilizzare solamente la ligasi per svolgere tutto il processo. La LCR sembra essere più specifica e sensibile della PCR ed arriva a distinguere mutazioni di una sola base. Anche per la LCR sono state ideate alcune varianti:
* G-LCR (LCR gap)
* (LCR gap asimmetrica) (it)
- Reakcja łańcuchowa ligazy, ligazowa reakcja łańcuchowa, LCR (z ang. ligase chain reaction) – metoda stosowana w biologii molekularnej do wykrywania określonych fragmentów kwasów nukleinowych. Dla poszukiwanej sekwencji projektuje się dwa komplementarne, bezpośrednio sąsiadujące z sobą fragmenty DNA (sondy), każdy o długości na przykład 20 nukleotydów. Jeśli szukana sekwencja znajduje się w mieszaninie reakcyjnej, wówczas sondy z nią hybrydyzują (łączą się), ustawiając się tuż obok siebie. Obecna w mieszaninie ligaza DNA ma wówczas możliwość utworzenia wiązania chemicznego między obiema sondami i zespolenia ich w jedną cząsteczkę DNA (w tym przykładzie o długości 40 nukleotydów). Etapy hybrydyzacji i ligacji powtarza się wielokrotnie, po czym przeprowadza elektroforetyczny rozdział mieszaniny w celu sprawdzenia obecności połączonych sond DNA (w tym przykładzie o długości 40 nukleotydów). (pl)
- Лигазная цепная реакция (LCR, ЛЦР) представляет собой метод амплификации ДНК, он отличается от PCR тем, что в нем используется термостабильная лигаза для соединения двух зондов или других молекул вместе, которые затем могут быть амплифицированы с помощью стандартной циклической полимеразной цепной реакции (ПЦР) (Barany, 1991). Каждый цикл приводит к удвоению молекулы нуклеиновой кислоты-мишени. Ключевым преимуществом ЛЦР является большая специфичность по сравнению с ПЦР. Таким образом, для правильной работы ЛЦР требуются два совершенно разных фермента: лигаза для соединения молекул зонда вместе и термостабильная полимераза (например, полимераза Taq) для амплификации тех молекул, которые участвуют в успешном лигировании. Зонды, участвующие в лигировании, сконструированы таким образом, что 5'-конец одного зонда непосредственно примыкает к 3'-концу другого зонда, тем самым обеспечивая необходимые субстраты групп 3'-ОН и 5'-PO4 для лигазы. Первоначально ЛЦР была разработана для обнаружения точечных мутаций; единственное несовпадение оснований на стыке двух молекул зонда - это все, что необходимо для предотвращения лигирования. При выполнении лигирования прямо в конце олигонуклеотидного зонда будут допускаться только идеально подобранные дуплексы праймера. ЛЦР также можно использовать для амплификации молекул матрицы, которые были успешно лигированы, с целью оценки эффективности лигирования и получения большого количества продукта с еще большей специфичностью, чем ПЦР. Таким образом, ЛЦР не обязательно является альтернативой, а скорее дополнением к ПЦР. (ru)
|
| dbo:wikiPageID
| |
| dbo:wikiPageLength
|
- 4348 (xsd:nonNegativeInteger)
|
| dbo:wikiPageRevisionID
| |
| dbo:wikiPageWikiLink
| |
| dbp:wikiPageUsesTemplate
| |
| dcterms:subject
| |
| gold:hypernym
| |
| rdf:type
| |
| rdfs:comment
|
- Die Ligase-Kettenreaktion (englisch Ligase Chain Reaction, LCR) ist seit 1989 ein Nachweisverfahren für geringe Mengen von Erbmaterial (DNA). (de)
- La Reacción en cadena de la ligasa o LCR (del inglés, Ligase Chain Reaction) es un método similar a la PCR, pero basándose en la función de una ligasa termoestable (normalmente la ligasa de Thermus aquaticus). Al igual que con la PCR, con la LCR se puede amplificar una secuencia de ADN concreta, así como determinar una mutación de una base nucleotídica. (es)
- The ligase chain reaction (LCR) is a method of DNA amplification. The ligase chain reaction (LCR) is an amplification process that differs from PCR in that it involves a thermostable ligase to join two probes or other molecules together which can then be amplified by standard polymerase chain reaction (PCR) cycling (Barany, 1991). Each cycle results in a doubling of the target nucleic acid molecule. A key advantage of LCR is greater specificity as compared to PCR. Thus, LCR requires two completely different enzymes to operate properly: ligase, to join probe molecules together, and a thermostable polymerase (e.g., Taq polymerase) to amplify those molecules involved in successful ligation. The probes involved in the ligation are designed such that the 5′ end of one probe is directly adjacent (en)
- La reazione a catena della ligasi (o Ligase chain reaction, LCR) è una variante della reazione a catena della polimerasi (Polymerase chain reaction o PCR).È una metodica che permette l'amplificazione di materiale genetico sfruttando un processo ciclico che viene ripetuto più volte. A differenza della PCR, però, viene sfruttata l'azione di una ligasi termostabile e la presenza di quattro oligonucleotidi in grado di appaiarsi, a due a due, a specifiche sequenze della molecola di DNA. Nella soluzione in cui si trova il materiale genetico si aggiunge la ligasi, gli oligonucleotidi (in quantità elevata), dessossiribonucleotidi trifosfati ed una DNA-polimerasi anch'essa termostabile. (it)
- Reakcja łańcuchowa ligazy, ligazowa reakcja łańcuchowa, LCR (z ang. ligase chain reaction) – metoda stosowana w biologii molekularnej do wykrywania określonych fragmentów kwasów nukleinowych. Dla poszukiwanej sekwencji projektuje się dwa komplementarne, bezpośrednio sąsiadujące z sobą fragmenty DNA (sondy), każdy o długości na przykład 20 nukleotydów. Jeśli szukana sekwencja znajduje się w mieszaninie reakcyjnej, wówczas sondy z nią hybrydyzują (łączą się), ustawiając się tuż obok siebie. Obecna w mieszaninie ligaza DNA ma wówczas możliwość utworzenia wiązania chemicznego między obiema sondami i zespolenia ich w jedną cząsteczkę DNA (w tym przykładzie o długości 40 nukleotydów). Etapy hybrydyzacji i ligacji powtarza się wielokrotnie, po czym przeprowadza elektroforetyczny rozdział mieszani (pl)
- Лигазная цепная реакция (LCR, ЛЦР) представляет собой метод амплификации ДНК, он отличается от PCR тем, что в нем используется термостабильная лигаза для соединения двух зондов или других молекул вместе, которые затем могут быть амплифицированы с помощью стандартной циклической полимеразной цепной реакции (ПЦР) (Barany, 1991). Каждый цикл приводит к удвоению молекулы нуклеиновой кислоты-мишени. Ключевым преимуществом ЛЦР является большая специфичность по сравнению с ПЦР. Таким образом, для правильной работы ЛЦР требуются два совершенно разных фермента: лигаза для соединения молекул зонда вместе и термостабильная полимераза (например, полимераза Taq) для амплификации тех молекул, которые участвуют в успешном лигировании. Зонды, участвующие в лигировании, сконструированы таким образом, что 5 (ru)
|
| rdfs:label
|
- Ligase-Kettenreaktion (de)
- Reacción en cadena de la ligasa (es)
- Reazione a catena della ligasi (it)
- Ligase chain reaction (en)
- Reakcja łańcuchowa ligazy (pl)
- Лигазная цепная реакция (ru)
|
| owl:sameAs
| |
| prov:wasDerivedFrom
| |
| foaf:isPrimaryTopicOf
| |
| is dbo:wikiPageDisambiguates
of | |
| is dbo:wikiPageRedirects
of | |
| is dbo:wikiPageWikiLink
of | |
| is foaf:primaryTopic
of | |
