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- Bei der Gateway-Klonierung handelt es sich um eine Methode zur Klonierung. Im Vergleich zur Klonierung durch Restriktion und Ligation hat sie eine höhere Klonierungseffizienz. Nach kurzer Zeit können bis zu 99 % positive Transformanten erhalten werden. Die Technik beruht auf dem sequenzspezifischen Rekombinationssystem des Phagen λ (einem Bakterienvirus), der mit Hilfe bestimmter Enzyme seine DNA in das Genom des Bakteriums Escherichia coli integriert. Der Integrationsprozess (Lysogenie) wird hierbei von zwei Proteinen katalysiert: der Integrase (Int) des Lambda-Phagen und den E. coli-Protein-Untereinheiten IHF a und IHF b (Integration Host Factors). Dieser reversible Vorgang benötigt spezifische Sequenzabschnitte (die attachment sites oder recombination sites – deutsch etwa Verbindungs- oder Rekombinationsstellen) in der Ziel-DNA, zwischen denen die zu übertragenden genetischen Informationen eingefügt werden können. Für ihre Integration sind auch an den Enden dieser zu transferierenden DNA-Abschnitte Verbindungsstellen erforderlich.Für die Exzision (Lyse) des DNA-Fragments wird zusätzlich das Enzym benötigt. (de)
- The Gateway cloning System, invented and commercialized by Invitrogen since the late 1990s, is a molecular biology method that enables researchers to efficiently transfer DNA-fragments between plasmids using a proprietary set of recombination sequences, the "Gateway att" sites, and two proprietary enzyme mixes, called "LR Clonase", and "BP Clonase". Gateway Cloning Technique allows transfer of DNA fragments between different cloning vectors while maintaining the reading frame. Using Gateway, one can clone subclone DNA segments for functional analysis. The system requires the initial insertion of a DNA fragment into a plasmid with two flanking recombination sequences called “att L 1” and “att L 2”, to develop a “Gateway Entry clone” (special Invitrogen nomenclature). Large archives of Gateway Entry clones, containing the vast majority of human, mouse and rat ORFs (open reading frames) have been cloned from human cDNA libraries or chemically synthesized to support the research community using NIH (National Institutes of Health) funding (e.g., Mammalian Gene Collection, http://mgc.nci.nih.gov/). The availability of these gene cassettes in a standard Gateway cloning plasmid helps researchers quickly transfer these cassettes into plasmids that facilitate the analysis of gene function. Gateway cloning does take more time for initial set-up, and is more expensive than traditional restriction enzyme and ligase-based cloning methods, but it saves time, and offers simpler and highly efficient cloning for down-stream applications. The technology has been widely adopted by the life science research community especially for applications that require the transfer of thousands of DNA fragments into one type of plasmid (e.g., one containing a CMV promoter for protein expression in mammalian cells), or for the transfer of one DNA fragment into many different types of plasmids (e.g., for bacterial, insect and mammalian protein expression). (en)
- Le Système de clonage Gateway, inventé et commercialisé par Invitrogen depuis les années 1990, est une méthode de biologie moléculaire qui permet aux chercheurs de transférer efficacement des fragments d'ADN entre des plasmides, en utilisant des séquences recombinantes propriétaires nommées "Gateway att", ainsi que des enzymes propriétaires nommées "LR Clonase" et "BP Clonase".La technique de clonage Gateway permet le transfert de fragments d'ADN entre différents vecteurs tout en gardant le bon ORF.On peut donc cloner ou sous-cloner des segments d'ADN pour effectuer des analyses fonctionnelles.Pour développer un "clone d'entrée Gateway" (selon la nomenclature spéciale d'Invitrogen), le système requiert l'insertion d'un fragment d'ADN dans un plasmide avec 2 séquences flanquantes appelées "attL1" et "attL2". De grandes archives de clones d'entrée Gateway, contenant la majorité des ORF des humains, souris et rats, ont été clonées depuis des bibliothèques d'ADN complémentaire humain ou synthétisées chimiquement pour la communauté des chercheurs. La disponibilité de ces cassettes de gènes dans un clonage Gateway standard aide les chercheurs à transférer rapidement ces cassettes dans des plasmides qui facilitent l'analyse de la fonction du gène.Le clonage Gateway prend plus de temps pour la configuration initiale, et est plus cher que les enzymes de restrictions traditionnelles ou les techniques de clonages basées sur des ligases, mais il économise du temps et permet un clonage simple et plus efficace pour les applications en aval (??). Cette technologie a été largement adoptée par la communauté de recherche des sciences de la vie, surtout pour des applications qui requièrent le transfert de milliers de fragments d'ADN dans de nombreux types de plasmides différents (par exemple pour l'expression de protéines bactériennes, humaines…) (fr)
- 高通量基因克隆技术（Gateway Cloning Technology），是由Invitrogen公司在二十世纪九十年代末发明并应用于分子生物学基因克隆的一项专利技术。该技术利用专有的重组序列使得DNA片段能够更有效地被转入质粒当中，可应用于大片段的基因克隆，并且在保持正确阅读框的前提下让不同表达载体间的DNA转移成为可能。 这一技术在插入的目的DNA片段两端整合att L1和att L2两个侧端重组序列（Flanking Recombination Sequence），来构建一个类似通道的结构并称之为“入门克隆”（Gateway Entry Clone）。据Invitrogen宣称Gateway技术使用99%有效且可逆的一小组重组反应 ，如此使得基因克隆不同于传统的限制性内切酶方法，避免了目的片段内存在切点的问题而使得大片段DNA保持其完整性，大大提高了克隆效率，常应用于大规模的DNA片段整合进同一种表达载体，因此称之为高通量基因克隆技术。 (zh)
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- 高通量基因克隆技术（Gateway Cloning Technology），是由Invitrogen公司在二十世纪九十年代末发明并应用于分子生物学基因克隆的一项专利技术。该技术利用专有的重组序列使得DNA片段能够更有效地被转入质粒当中，可应用于大片段的基因克隆，并且在保持正确阅读框的前提下让不同表达载体间的DNA转移成为可能。 这一技术在插入的目的DNA片段两端整合att L1和att L2两个侧端重组序列（Flanking Recombination Sequence），来构建一个类似通道的结构并称之为“入门克隆”（Gateway Entry Clone）。据Invitrogen宣称Gateway技术使用99%有效且可逆的一小组重组反应 ，如此使得基因克隆不同于传统的限制性内切酶方法，避免了目的片段内存在切点的问题而使得大片段DNA保持其完整性，大大提高了克隆效率，常应用于大规模的DNA片段整合进同一种表达载体，因此称之为高通量基因克隆技术。 (zh)
- The Gateway cloning System, invented and commercialized by Invitrogen since the late 1990s, is a molecular biology method that enables researchers to efficiently transfer DNA-fragments between plasmids using a proprietary set of recombination sequences, the "Gateway att" sites, and two proprietary enzyme mixes, called "LR Clonase", and "BP Clonase". Gateway Cloning Technique allows transfer of DNA fragments between different cloning vectors while maintaining the reading frame. Using Gateway, one can clone subclone DNA segments for functional analysis. The system requires the initial insertion of a DNA fragment into a plasmid with two flanking recombination sequences called “att L 1” and “att L 2”, to develop a “Gateway Entry clone” (special Invitrogen nomenclature). (en)
- Bei der Gateway-Klonierung handelt es sich um eine Methode zur Klonierung. Im Vergleich zur Klonierung durch Restriktion und Ligation hat sie eine höhere Klonierungseffizienz. Nach kurzer Zeit können bis zu 99 % positive Transformanten erhalten werden. (de)
- Le Système de clonage Gateway, inventé et commercialisé par Invitrogen depuis les années 1990, est une méthode de biologie moléculaire qui permet aux chercheurs de transférer efficacement des fragments d'ADN entre des plasmides, en utilisant des séquences recombinantes propriétaires nommées "Gateway att", ainsi que des enzymes propriétaires nommées "LR Clonase" et "BP Clonase".La technique de clonage Gateway permet le transfert de fragments d'ADN entre différents vecteurs tout en gardant le bon ORF.On peut donc cloner ou sous-cloner des segments d'ADN pour effectuer des analyses fonctionnelles.Pour développer un "clone d'entrée Gateway" (selon la nomenclature spéciale d'Invitrogen), le système requiert l'insertion d'un fragment d'ADN dans un plasmide avec 2 séquences flanquantes appelées " (fr)
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- Gateway-Klonierung (de)
- Technologie Gateway (fr)
- Gateway Technology (en)
- 高通量基因克隆技术 (zh)
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