Inverse polymerase chain reaction (Inverse PCR) is a variant of the polymerase chain reaction that is used to amplify DNA with only one known sequence. One limitation of conventional PCR is that it requires primers complementary to both termini of the target DNA, but this method allows PCR to be carried out even if only one sequence is available from which primers may be designed. Finally the sequence of the sequenced PCR product is compared against sequence databases.It is used in case of chromosome crawling.
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| - تفاعل البوليميراز المعكوس المتسلسل (ar)
- Inverse Polymerase-Kettenreaktion (de)
- PCR inverse (fr)
- Inverse polymerase chain reaction (en)
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| - تفاعل سلسلة البوليميراز العكسي المتسلسل (عكس المعدل الذروي للخلية) هو متغير من تفاعل البوليميراز المتسلسل الذي يستخدم لتضخيم الحمض النووي مع تسلسل واحد فقط معروف. ومن القيود التي تحد من المعدل الذروي للخلية التقليدية أنها تتطلب اٍبرانات مكمّلة لكل من الـ مصطلحات للحمض النووي المستهدف، ولكن هذه الطريقة تسمح بإجراء المعدل الذروي للخلية حتى لو كان تسلسل واحد فقط متاحًا يمكن تصميم التمهيديات منه. (ar)
- Als Inverse Polymerase-Kettenreaktion oder kurz Inverse PCR versteht man eine Abwandlung der PCR, mit der man unbekannte Genbereiche amplifizieren kann. Bei der Inversen PCR benötigt man einen relativ kurzen, aber von der Sequenz her bekannten DNA-Abschnitt. Von diesem aus stellt man zwei Primer her, die im Gegensatz zur herkömmlichen PCR nicht aufeinander zugerichtet sind, sondern deren Richtung in die unbekannten umgebenen Bereiche zielt und zwischen denen eine Restriktionsstelle liegt. Dann isoliert man die DNA und macht einen Verdau mit einem zweiten Restriktionsenzym, das nicht im bisher bekannten Bereich schneidet, sondern außerhalb. Es folgt eine sogenannte Ligation, bei der die geschnittenen DNA-Bruchstücke zirkularisieren, das heißt einen DNA-Ring ausbilden. Danach schneidet man m (de)
- Inverse polymerase chain reaction (Inverse PCR) is a variant of the polymerase chain reaction that is used to amplify DNA with only one known sequence. One limitation of conventional PCR is that it requires primers complementary to both termini of the target DNA, but this method allows PCR to be carried out even if only one sequence is available from which primers may be designed. Finally the sequence of the sequenced PCR product is compared against sequence databases.It is used in case of chromosome crawling. (en)
- La PCR inverse ou IPCR est une méthode particulière de réaction en chaîne par polymérase. Elle ne doit pas être confondue avec la transcriptase inverse qui consiste à faire de l'ADN à partir d'ARN. Elle permet de dépasser la limite connue de la PCR : connaître la séquence.Cette technique de biologie moléculaire sert à amplifier une séquence inconnue. Elle se réalise en trois étapes : (fr)
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| - تفاعل سلسلة البوليميراز العكسي المتسلسل (عكس المعدل الذروي للخلية) هو متغير من تفاعل البوليميراز المتسلسل الذي يستخدم لتضخيم الحمض النووي مع تسلسل واحد فقط معروف. ومن القيود التي تحد من المعدل الذروي للخلية التقليدية أنها تتطلب اٍبرانات مكمّلة لكل من الـ مصطلحات للحمض النووي المستهدف، ولكن هذه الطريقة تسمح بإجراء المعدل الذروي للخلية حتى لو كان تسلسل واحد فقط متاحًا يمكن تصميم التمهيديات منه. (ar)
- Als Inverse Polymerase-Kettenreaktion oder kurz Inverse PCR versteht man eine Abwandlung der PCR, mit der man unbekannte Genbereiche amplifizieren kann. Bei der Inversen PCR benötigt man einen relativ kurzen, aber von der Sequenz her bekannten DNA-Abschnitt. Von diesem aus stellt man zwei Primer her, die im Gegensatz zur herkömmlichen PCR nicht aufeinander zugerichtet sind, sondern deren Richtung in die unbekannten umgebenen Bereiche zielt und zwischen denen eine Restriktionsstelle liegt. Dann isoliert man die DNA und macht einen Verdau mit einem zweiten Restriktionsenzym, das nicht im bisher bekannten Bereich schneidet, sondern außerhalb. Es folgt eine sogenannte Ligation, bei der die geschnittenen DNA-Bruchstücke zirkularisieren, das heißt einen DNA-Ring ausbilden. Danach schneidet man mit dem ersten Restriktionsenzym, das seine Schnittstelle im bekannten Bereich zwischen den Primern hat. Man erhält somit mit ein wenig Glück einen bisher unbekannten DNA-Bereich der zwischen zwei zueinanderhin gerichteten Primern liegt und der eine für eine PCR passende Länge hat. Diesen kann man dann mit der herkömmlichen PCR amplifizieren. Diese Technologie wird z. B. dazu benutzt um Stellen zu untersuchen, in die z. B. Transposons oder andere Fremd-Gene integriert haben. (de)
- Inverse polymerase chain reaction (Inverse PCR) is a variant of the polymerase chain reaction that is used to amplify DNA with only one known sequence. One limitation of conventional PCR is that it requires primers complementary to both termini of the target DNA, but this method allows PCR to be carried out even if only one sequence is available from which primers may be designed. Inverse PCR is especially useful for the determination of insert locations. For example, various retroviruses and transposons randomly integrate into genomic DNA. To identify the sites where they have entered, the known, "internal" viral or transposon sequences can be used to design primers that will amplify a small portion of the flanking, "external" genomic DNA. The amplified product can then be sequenced and compared with DNA databases to locate the sequence which has been disrupted. The inverse PCR method involves a series of restriction digests and ligation, resulting in a looped fragment that can be primed for PCR from a single section of known sequence. Then, like other polymerase chain reaction processes, the DNA is amplified by the temperature-sensitive DNA polymerase: 1.
* A target region with an internal section of known sequence and unknown flanking regions is identified 2.
* Genomic DNA is digested into fragments of a few kilobases by a usually low-moderate frequency (6-8 base) cutting restriction enzyme. 3.
* Under low DNA concentrations or quick ligation conditions, self-ligation is induced to give a circular DNA product. 4.
* PCR is carried out as usual with the circular template, with primers complementary to sections of the known internal sequence pointing outwards. Finally the sequence of the sequenced PCR product is compared against sequence databases.It is used in case of chromosome crawling. (en)
- La PCR inverse ou IPCR est une méthode particulière de réaction en chaîne par polymérase. Elle ne doit pas être confondue avec la transcriptase inverse qui consiste à faire de l'ADN à partir d'ARN. Elle permet de dépasser la limite connue de la PCR : connaître la séquence.Cette technique de biologie moléculaire sert à amplifier une séquence inconnue. Elle se réalise en trois étapes : 1.
* Insérer une séquence connue au milieu de la séquence inconnue à amplifier ; 2.
* Couper la séquence inconnue avec une enzyme de restriction et religuer les bouts via une ADN ligase pour circulariser ; 3.
* Couper la séquence connue par une enzyme de restriction connue, et démarrer la PCR avec pour amorce la séquence connue. (fr)
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